一株抗百菌清单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫学检测技术领域。本发明的一株抗百菌清单克隆抗体杂交瘤细胞株D号，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.9304。通过百菌清完全抗原与等量弗氏佐剂混合乳化后，通过背部皮下注射免疫BALB/c小鼠。第一次免疫用完全弗氏佐剂，之后都用不完全弗氏佐剂。将高效价IC50的小鼠的脾细胞通过PEG方法与小鼠骨髓瘤细胞融合，经过间接竞争ELISA筛选和三次亚克隆，得到一株杂交瘤细胞株D号。此细胞株D号分泌的单克隆抗体，对百菌清具有较好的特异性和检测灵敏度（IC50值为1.5μg/L），可以用于食品安全中百菌清的残留检测。