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半滑舌鳎的细胞建系和鱼类培养基的设计和研究

技术编号：783	成熟度：小试
所属领域：食品饮料	转让模式：授权
来源地：山东青岛市	金额：面议

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项目成果简介：1.解决海水鱼类细胞培养中的三个关键技术： ①.原代培养材料的消毒处理技术，克服原代培养中细胞易污染的难题； ②.海水鱼类单细胞悬液制备技术，提高原代细胞培养的成活率； ③.鱼类细胞系的永生性转化技术，使原代培养的细胞系可以大量转化为永生细胞系。从而为推动鱼类分子生物学.免疫学.病毒学和遗传育种等研究的发展，提供有效的实验工具。 2.建立半滑舌鳎的永生性细胞系1～2个。 3.设计.研制一种海水鱼类细胞专用培养基。项目背景：半滑舌鳎的市场价格高，又因其肉质细腻鲜美，生长速度快，而成为当前养殖的热门新兴鱼种，具有潜在的巨大的经济效益。关键技术和创新点：1.海水过滤.煮沸.消毒；消毒海水漂洗活鱼多次。将漂洗干净的活鱼移入含高浓度抗生素的消毒海水中暂养24h以上，无菌室中取出活鱼，75%酒精擦拭消毒取材部位或解剖部位，超净工作台内取材。 2.海水鱼类单细胞悬液制备技术：锋利眼科剪刀将组织块剪碎成约1mm3的小块，PBS漂洗2-3次，去血污，优化酶解消化条件，包括胰蛋白酶和胶原酶（单酶或双酶）消化的浓度和作用时间，使消化后的细胞和组织块混合物挤过前端带细金属网的注射器，细胞悬液离心，1000转/分，5-10分钟，鱼类细胞培养基重悬细胞沉淀，接种到培养瓶。 3.海水鱼类细胞专用培养基的设计：分析比较在鱼类细胞培养中应用效果较好的几种哺乳动物培养基如Leibovitz's L-15.DMEM和MEM等的基础上，设计一个添加NaCl的盐度适宜.渗透压适宜的人工合成鱼类细胞专用培养基。该培养基在使用前添加适量的鲤鱼或草鱼血清以及小牛血清，成为适于大多数海水鱼类细胞生长的生长培养基，提高海水鱼类细胞建系的成功率。 4.鱼类细胞系的永生性转化技术：紫外线照射处理体外培养鱼类细胞，诱导细胞生长调控基因，其目的是诱导细胞生长调控基因如p53发生突变，然后恢复正常培养条件，从而筛选永生性转化鱼类细胞，继续克隆培养，以得到永生性鱼类细胞系。项目技术水平和创新程度。 ①.适合海水鱼类细胞培养的专用培养基，是国内乃至国际领先的技术和成果 ②.建立的半滑舌鳎永生细胞系填补了国际上在此领域的空白。 ③.本课题拟解决的四个关键问题，都是国内首创。社会经济效益：适合海水鱼类细胞培养的专用培养基的研制成功，可以填补这一领域的空白，并为产业化创造条件。

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